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本试剂盒适用于从各种丝状真菌中提取总蛋白。优化的裂解液配方可以充分释放各种有隔膜菌丝和无隔膜菌丝蛋白以及各种菌丝变态体蛋白，提取过程简单方便，可在1小时内完成。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组分，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒的蛋白提取组分中不含有不可透析除去的去垢剂组分，不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组分，最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。

本试剂盒的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移，因此使用本制品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry,MS)检测和分析，蛋白质组学(proteomics)等相关研究。

• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 试剂拆封后请尽快使用完！

• 仪器准备：离心机、振荡器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒；
  
• 试剂准备：PBS缓冲液、蛋白定量试剂盒；
  
• 耗材准备：离心管、吸头、一次性手套。

• 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
  
• 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
  
• 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
  
• 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
  
• 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
  
• 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 提取液制备：
  将试剂A1和试剂A2混合，配成蛋白提取液A，充分混匀备用。
  每500μL真菌蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
  
• 取培养丝状真菌，在4℃，5000×g条件下离心5～10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集菌体。
  
• 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
  
• 将菌体置于研钵中用液氮研磨至粉末。
  
• 每100mg菌体中加入300μL～500μL蛋白提取液，混匀后，在2～8℃条件下振荡20～30分钟。
  
• 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到真菌总蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或用于下游实验。
  
• 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。

• 蛋白浓度低？
  处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法，或者Bradford法。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组分，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。